苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測(cè)試劑盒(苯丙氨酸微板法)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

苯丙氨酸解氨酶(L- phenylalanine ammonia-lyase，PAL)是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶，該酶多存在于高等植物、酵母、菌類(lèi)可溶性部分物質(zhì)，是1961年J.Koukol在大麥中發(fā)現(xiàn)的，推測(cè)其分子量約為30萬(wàn)，這是一個(gè)可把苯丙氨酸用于酚類(lèi)化合物合成的酶。在組織中的活性可隨外界因素而發(fā)生顯著變化，用光照、病傷害、植物激素處理等會(huì)使活性顯著增加，在多數(shù)情況下在組織中活性增加時(shí)，酶發(fā)生失活作用，這時(shí)組織中具有活性酶的量很快就會(huì)減少，據(jù)認(rèn)為這種失活是與類(lèi)蛋白質(zhì)物質(zhì)作用有關(guān)，測(cè)定細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間代謝物及關(guān)鍵酶活性,可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

雅吉生物苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測(cè)試劑盒(苯丙氨酸微板法)檢測(cè)原理是以苯丙氨酸作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測(cè)定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀290nm 處檢測(cè)吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算，主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的苯丙氨酸解氨酶活性,尤其適用于檢測(cè)水果中苯丙氨酸解氨酶活性。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測(cè)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測(cè)。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙氨酸解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔，求平均值。

3、PAL檢測(cè)︰

以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為   A_測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A_測(cè)定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度。

計(jì)算:

PAL活性單位的定義︰在該實(shí)驗(yàn)條件下，每小時(shí)吸光度變化0.01所需酶量為一個(gè)活性單位。

組織樣品PAL(U)={(A_測(cè)定1-A_測(cè)定0)×V_T}/(W×V_s×0.01×t)

液體樣品PAL(U)=(A_測(cè)定1-A_測(cè)定0)/(0.01×t)

式中:

A_測(cè)定1=40℃孵育1h后測(cè)定孔的吸光度

A_測(cè)定0=加入PAL Assay buffer后立即檢測(cè)的測(cè)定管吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V_T=提取酶液的總體積(ml)

V_s=測(cè)定時(shí)所用酶液體積(ml)

t=反應(yīng)時(shí)間(h)=1

注意事項(xiàng)∶

1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測(cè)，亦可-20°℃保存。

3、如果沒(méi)有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積。

4、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期:6個(gè)月有效，4℃運(yùn)輸，4℃保存。