丙酮酸檢測(cè)試劑盒(二硝基苯肼微板法)

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

丙酮酸(Pyruvic acid，PA)又稱2-氧代丙酸，是參與整個(gè)生物體基本代謝的中間產(chǎn)物之一，可通過乙酰輔酶A和三羧酸循環(huán)實(shí)現(xiàn)體內(nèi)糖、脂肪和氨基酸間的互相轉(zhuǎn)化，丙酮酸在三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝聯(lián)系中起著重要的樞紐作用。丙酮酸是糖無(wú)氧代謝的產(chǎn)物，科研工作者常將丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循環(huán)衰竭的程度。丙酮酸檢測(cè)可采用乳酸脫氫酶催化法或二硝基苯肼比色法。

雅吉生物丙酮酸檢測(cè)試劑盒(二硝基苯肼微板法)檢測(cè)原理是在酸性條件下,丙酮酸與二硝基苯肼反應(yīng)，生成丙酮酸-二硝基苯腙復(fù)合物，后者經(jīng)氧化呈棕紅色，通過酶標(biāo)儀測(cè)定520nm處吸光度，據(jù)此通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比可以計(jì)算出PA水平。該試劑盒可用于檢測(cè)植物、細(xì)胞或組織、血清等樣品中內(nèi)源性的丙酮酸含量,尤其適用植物樣品丙酮酸含量的檢測(cè)。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

二、產(chǎn)品組成：

三、自備材料：

1、離心管或小試管

2、蒸餾水

3、酶標(biāo)儀、96孔板

四、操作步驟(僅供參考)：

1、配制組織勻漿液(1×)∶取10ml組織勻漿液(3×)加入20ml蒸餾水即成。

2、配制PA Assay Buffer (1x)∶取10ml PA Assay Buffer (1.5×)加入5ml蒸餾水即成。

3、準(zhǔn)備樣品︰

①血清、尿液及其他體液樣品:血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，尿液通常也可以直接用于測(cè)定，-20°C凍存。

②組織樣品︰稱取1g組織樣品置于勻漿器中，再加入1ml組織勻漿液(1x)仔細(xì)研磨，振搖提取靜置30min ,取上清液4000rpm離心10min ,取上清液,用組織勻漿液(1×)定容至2ml , -20℃凍存，用于PA的檢測(cè)。

③植物材料︰稱取1g植物材料置于勻漿器中，再加入1ml組織勻漿液(1×)仔細(xì)研磨，振搖提取,靜置30min ,取上清液4000rpm離心10min ,取上清液,用組織勻漿液(1×)定容至2ml , -20℃凍存，用于PA的檢測(cè)。

④高濃度樣品:如果樣品中含有較高濃度的PA，可以使用原有的裂解液或PBS等進(jìn)行稀釋，如雞血清可稀釋5～10倍后檢測(cè)。

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測(cè)血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測(cè)組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

a、檢測(cè)血清、尿液等樣品時(shí)，用96孔板按下表操作:

b、檢測(cè)組織樣品時(shí)，用96孔板按下表操作:

5、PA加樣︰按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PA濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

a、檢測(cè)血清、尿液等樣品時(shí)，用96孔板按下表操作: