BCA Protein Assay Kit試劑是根據(jù)目前常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一－BCA（bicinchoninic acid）

法改良研制而成，該試劑盒具有蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單性，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。本試劑盒的原理是蛋白質(zhì)分子中

的肽鍵結(jié)構(gòu)在堿性環(huán)境下能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，將 Cu2+還原成Cu+，而B(niǎo)CA試劑可敏感特異地與Cu+結(jié)合，

形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物，并在562nm處有最大光吸收值，該復(fù)合物顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可根據(jù)吸收值的大小

來(lái)測(cè)定蛋白的含量，1小時(shí)內(nèi)即可完成蛋白定量檢測(cè)。BCA蛋白定量試劑盒含有牛血清白蛋白（BSA）溶液作為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液

，測(cè)定范圍為25～2000 μg/ml。該試劑盒可用于50次試管檢測(cè)或500次ELISA板檢測(cè)。

組分

組分名稱數(shù)量保存

BCA Reagent A100 ml室溫

BCA Reagent B1 ml× 2室溫

BSA 標(biāo)準(zhǔn)品（2 mg/ml）1 ml× 2-20℃

儲(chǔ)存

BCA Reagent A和BCA Reagent B置于室溫保存，BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)品置于-20℃可保存一年。

主要特征

便捷快速：與Lowry法相比，該方法可在1 小時(shí)內(nèi)完成蛋白質(zhì)定量檢測(cè)，工作液配制后24h內(nèi)使用無(wú)影響。

靈敏準(zhǔn)確：測(cè)定范圍是20～2000 μg/ml（562 nm讀數(shù)）。在測(cè)定范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，變異系數(shù)小。

兼容性好：與Bradford法相比，對(duì)去垢劑耐受能力大為提高，在Tween20低于4%，NP40低于5.0%，SDS低于4%，Triton X-100 低于4%的濃度范圍內(nèi)，即可獲得準(zhǔn)確定量結(jié)果（其余物質(zhì)耐受度詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）。使用微板法測(cè)定時(shí)將體積按比例減小。

BCA Protein Assay Kit試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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