CCK-8細(xì)胞增殖和凋亡檢測(cè)試劑增殖與毒性檢測(cè)試劑是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)的試劑，因其操作簡單快速、高靈敏度且細(xì)胞毒性低等成為替代MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長密度的最好方法。該試劑盒利用水溶性四唑鹽-WST?-8在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

優(yōu)勢(shì)

靈敏度高，數(shù)據(jù)重復(fù)性好

操作簡單，安全性高

細(xì)胞毒性低，無需放射性同位素

單一組分，無需配制

應(yīng)用

細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗(yàn)

儲(chǔ)存

-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反復(fù)凍融會(huì)增加背景值。

注意事項(xiàng)

1. 接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接種幾個(gè)孔就混勻一下。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)基容易揮發(fā)，為了減少誤差，建議培養(yǎng)板的四邊每孔只加培養(yǎng)基或PBS，而不作為指標(biāo)檢測(cè)孔。

2. 本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。

3. 用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。

4. 培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異。一般情況下，白細(xì)胞較難染色，因此需要較長的培養(yǎng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量 (～105個(gè)細(xì)胞/孔)。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難染色。對(duì)于懸浮細(xì)胞，在培養(yǎng)1- 4小時(shí)后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目察染色程度或用酶標(biāo)儀測(cè)定決定。若染色困難，可將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定。 染色的最佳時(shí)間可定為懸浮細(xì)胞的最佳培養(yǎng)時(shí)間。對(duì)于貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)間一般為1-4小時(shí)，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據(jù)細(xì)胞種類而定，需要摸索一下條件)。

5. 若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化或 pH發(fā)生變化，建議更換新鮮的培養(yǎng)基后再加CCK-8試劑。

CCK-8細(xì)胞增殖和凋亡檢測(cè)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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